碱性磷酸酶染色CALP Stain Kit与非特异性酯酶染色的介绍及染色操作方法

碱性磷酸酶染液,用于石蜡切片、冰冻切片、骨髓细胞涂片、血液涂片等的碱性磷酸酶染色,又称同时偶联法碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨中。非特异性反应少,结果可靠。

成熟中性粒细胞中含有较多碱性磷酸酶。在碱性条件下,碱性磷酸酶经镁离子激活后能将磷酸酯水解为磷酸钠和甘油,磷酸钠再与氯化钙、硝酸钴、硫化铵发生一系列化学反应,生成棕色的硫化钴定位于胞质内。

介绍一下碱性磷酸酶染色的方法:

1.需要准备的试剂:

(1)孵育液:30g/Lβ-甘油磷酸磷酸磷酸钠5ml,20g/L巴比妥钠5ml,20g/LCaCl210ml,其pH以9.2~9.5为宜。

(2)20g/L硝酸钴。

(3)20g/L硫化铵(新鲜配制),或10ml蒸馏水加硫化铵4滴混合。

(4)10g/L伊红。

操作方法

(1)将标本用95%乙醇固定10min,晾干。

(2)置标本于37℃的孵育液中,保温6~8小时。

(3)加20g/L硝酸钴5min。

(4)流水冲洗,滴加20g/L硫化铵5min。

(5)流水冲洗,加10g/L伊红复染5min。

(1)孵育液:30g/Lβ-甘油磷酸磷酸磷酸钠5ml,20g/L巴比妥钠5ml,20g/LCaCl210ml,其pH以9.2~9.5为宜。

(2)20g/L硝酸钴。

(3)20g/L硫化铵(新鲜配制),或10ml蒸馏水加硫化铵4滴混合。

(4)10g/L伊红。

正常值 成熟中性粒细胞呈阳性,其他细胞均呈阴性。阳性积分正常参考值:80分以下(以计算100个中性杆状核和分叶核粒细胞为准)。

在临床上的意义:

积分降低:见于病毒感染,恶性组织细胞增生症,阵发性睡眠性血红蛋白尿症,急、慢性粒细胞性自血病,红、白血病,骨髓增生异常综合征,继发性红细胞增多症,急性单核细胞性白血病,慢性淋巴细胞白血病。当病情缓解时,积分又可上升到正常。

积分升高:见于化脓性细菌感染、急性大出血、原发性血小板增多症、再生障碍性贫血、红血病、骨髓增生性疾病、急性淋巴细胞白血病、类白血病反应、恶性淋巴瘤、恶性肿瘤、激素治疗等。再生障碍性贫血治疗好转时,积分可降低。

非特异性酯酶染色

用于急性单核细胞白血病与其他类型白血病的鉴别诊断。在急性单核细胞白细胞病时,NSE为强阳性反应;而粒细胞和淋巴细胞为阴性反应。

血细胞中所含酯酶各不一致,但皆系作用于短链脂肪酸的酯酶,统称非特异性酯酶。其显示方法是采用偶氮偶联法。由于提供水解的基质不同,血细胞中常见酯酶有以下几种:

α-乙酸萘酚酯酶(α-naphthol acetate esterace,α-NAE)

乙酸AS-D萘酚酯酶(naphthol-AS-D-acetate esterase,AS-D-AE)

醋酸AS萘酚酯酶(naphthol-AS-acetate esterase,AS-AE)

氯化醋酸AS-D萘苯分醋酶(naphthol-AS-D-Chloroacetate esterase,AS-D-CE)

非特异性酯酶染色检查nonspecificesterase,NSEα-醋酸萘酚酯酶(α-NSE)染色检查、单核细胞型酯酶染色检查能将基质液中的α-醋酸萘酚水解,产生α-萘酚,再与重氮染料偶联,形成不溶性的有色沉淀,定位于胞质内。

碱性磷酸酶染液(偶氮偶联法,适用于细胞样本)

酸性磷酸酶染液

细胞活性鉴别染液

血管通透性测试(伊文思蓝)染液

过氧化物酶染液

快速无毒改良巴氏染液

亚甲蓝染液

TTC染液

快速姬姆萨染液(适用于血涂片、骨髓涂片染色)

快速姬姆萨染液(适用于疟原虫染色)

快速姬姆萨染液(适用于附红体染色)

环保快速抗酸染液

石蜡切片抗酸染液

酸性酯酶染液

中性酯酶染液

碱性酯酶染液

双重酯酶染液

糖原染液

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