组织学技术 封固
封固(封片)
切片染色后,在标本上滴加封固剂,再在上面盖上盖玻片,使组织处于载玻片虑盖玻片之间,既保护标本不被机械损坏,也能防止灰尘污染
封固分为干性封固(干封)和湿性封固(湿封)两种。
一、封固的类型
干封法:组织染色后,经脱水、透明,再滴加封固剂保存组织。
湿封法:组织染色后,不用脱水,超脱加封固剂保存组织
二、封固剂
(一)干性封固剂
中性树胶:经各级酒精脱水,二甲苯等透明,滴树胶加盖玻片封固。最常用
DPX封固剂:同树胶
加拿大树胶:同树胶。现已少用
阿拉伯胶:少用
达玛胶(Darma):用于Golgi或Cox法神经组织染色不加盖玻片的封固。选用颜色淡的胶。溶于二甲苯、苯和氯仿。
香柏油:多用于Giemsa染色涂片的封固,不易褪色,但干固需很长时间
Ditrene 80:溶于二甲苯成无色液体,对碱性染料的成分不易褪色
DPX封固剂(Kirkpatrick-Lendrum封固剂):(有现成的试剂)
Ditrene 80 10克溶于二甲苯40毫升,再加磷酸甲苯或磷酸三甲酚或磷酸苯二酸二丁酯7.5毫升
封片时用量多些,避免二甲苯挥发后出现气泡、组织收缩
(二)湿性封固剂(水溶性液态封固剂)
水溶性。故标本染色后不需脱水透明,从水中取出切片,滴加水溶性封固剂,加盖玻片封固
又分为液体封固剂和固体封固剂),主要用于脂肪染色,有一些酶组化和呆乳动物的卵细胞等
液体封固剂:主要成分为甘油
甘油:直接加甘油封固
甘油水:甘油50毫升,蒸馏水50毫升,加石炭酸少量防腐
甘油酒精:甘油10毫升,33%酒精30毫升
水溶性固态封固剂:主要成分是明胶和甘油。常温下为固体,用时加温熔化,滴在切片上,加盖玻片封固,明胶却后凝固成透明固态,统称甘油明胶。主要有下列几种。
Baker甘油明胶:优质明胶5克溶于蒸馏水25毫升,加甘油35毫升和蒸馏水400毫升,石炭酸0.25克防腐。温箱内过滤
Fischer甘油明胶:硼砂5克溶于蒸馏水250毫升,加甘油25毫升,明胶40克,加温溶解。若较稀,可减少水的量
Kaiker甘油明胶:明胶7克溶于蒸馏水42毫升,加热熔化,加甘油40毫升,石炭酸0.5克
Kisser甘油明胶:明胶50克,甘油150毫升,溶于蒸馏水175毫升,石炭酸少量(防腐)
三、封固的方法
(一)干封法
具体操作略。
(二)湿封
具体操作略。
四、注意事项
尽量防止气泡产生。如有气泡,用镊子头端在盖玻片一侧下压,使气泡从旁边逸出,较小的气泡只要不在组织上,无妨;如在组织上尽量排出,实在排不出,应重新滴胶封固
(组织学技术全部结束)