海分枝杆菌基因敲除技术构建原理

海分枝杆菌基因敲除技术原理与实验步骤

采用噬菌体介导的同源重组进行基因敲除：首先构建同源交换位点（AES），随后将其整合到海分枝杆菌噬菌体基因组中，获得噬菌粒（phasmid）；将噬菌粒导入耻垢分枝杆菌，获得整合有同源交换位点的重组噬菌体，经体外扩增获得高滴度的重组噬菌体，对海分枝杆菌进行转染；将转染后的海分枝杆菌涂布到含潮霉素抗性的固体培养基上，30℃培养2-3周，挑取单克隆，通过PCR等方式进行验证。