养细胞是一件戳心戳肺的事情，你要像照顾小孩一样仔细对待，爱护她，呵护她。如果你照顾的时候能注意这些问题，会让你的细胞养的更好。下面小麦就将养细胞的注意事项跟大家交流一下。

细胞培养前的准备

在您带上手套开始细胞培养之前,先检查一下移液管和瓶子的数量是否充足,以免在开始实验后再次出入操作台，这样可以降低细胞污染的风险。

细胞培养基也应先预热,选择只预热部分培养基而非整瓶加热,不但可以节约实验时间,而且可以避免因反复加热培养基而造成的蛋白质降解。

结束操作后,别忘了培养基对光敏感,应尽可能避光保存。

细胞培养的定期检查

定期检查培养细胞的形态，即形状和外观，对于细胞培养实验取得成功至关重要。

除确认细胞的健康状态外，每次操作细胞时通过肉眼和显微镜检查细胞还可早期发现污染征象，避免污染扩散至实验室其他细胞。

细胞变质的征象

细胞变质的征象包括核周出现颗粒、细胞与基质解离以及细胞质空泡形成。

这些变质征象可能为多种原因所致，例如：培养物污染、细胞系衰老或培养基中存在毒性物质，或者这些征象仅表明培养物需要更换培养基。

变质严重时将会成为不可逆的变化。

细胞培养通风橱的消毒及布局

保持细胞培养通风橱内的整洁有序，将所有物品置于直视范围内。

向放入通风橱内的所有物品喷洒70%乙醇，擦拭清洁进行消毒。

在通风橱中部开阔处放置细胞培养容器；移液器置于右前方易于取用；试剂和培养基置于右后方便于吸取；试管架置于中后部；小型容器置于左后部用于盛放废液。

培养瓶/皿等物品的无菌操作

无菌培养瓶、试剂瓶、培养皿等物品使用时方可揭开盖子，不得将其开放暴露于环境中，操作完成后尽快盖上盖子，取下盖子时应将盖子开口朝下放在工作台面上。

进行无菌操作时不要说话、唱歌或吹口哨。尽快完成实验，以尽量避免污染。

细胞培养中可能的污染物

细胞培养污染物主要分为两类：

化学污染物,如培养基、血清和水中的杂质、内毒素、增塑剂和去污剂。

生物污染物，如细菌、霉菌、酵母、病毒、支原体以及其他细胞系的交叉污染。

可通过充分了解污染源以及采用良好的无菌技术，降低污染发生的频率和严重程度。

交叉污染的确认

交叉污染虽不如微生物污染普遍，但与HELA细胞及其他生长迅速的细胞系间广泛的交叉污染是个明确的问题，会造成严重后果。

从声誉好的细胞库获取细胞系、定期检查细胞系性质及采用良好的无菌技术有助于避免交叉污染。

通过DNA指纹图谱、核型分析和同位素分析可确认有无交叉污染。

细胞换液注意事项

为细胞换液时，要沿着培养瓶的一侧轻轻地加入，而不是直接加到细胞中，以免损伤细胞，当培养的细胞株较为脆弱时尤其需要注意。

使用无菌玻璃吸管或一次性塑料吸管和移液器操作液体时，每支吸管只能使用一次，以免交叉污染。

细胞传代的时间把握

当细胞呈指数增殖，贴壁培养的细胞已占据所有可用基质、没有扩增空间，或悬浮培养的细胞已超过培养基质所支撑的能力，无法进一步生长时，细胞增殖速度将大大降低甚至完全停止。

为了将细胞密度维持在最佳水平，以便细胞继续生长，并且刺激进一步增殖，必须对细胞进行传代。

细胞培养中使用抗生素的注意事项

细胞培养时不应长期使用抗生素，因为连续使用抗生素会促进抗生素耐药性细胞株的产生，导致轻度污染持续存在。

抗生素只能作为对付污染的最后手段短期使用，并尽快撤除。

如果长期使用抗生素，则应同时进行无抗生素培养，以便作为鉴别隐性感染的对照。

细胞冻存的必要性

连续培养的细胞系容易发生遗传漂变，有限细胞系最终会发生衰老，所有培养的细胞都易受到微生物污染，即使运转情况最好的实验室也会遇到设备故障的问题。

由于已建立的细胞系是一种宝贵资源，更换细胞系成本高昂，而且耗费时间，因此，必须将其冷冻起来，长期保存。

细胞冻存的事项

应在细胞浓度高的情况下进行细胞培养冻存，并且细胞传代的次数尽可能少。

在冻存前确保活细胞的百分比至少为90%。

请注意，最佳冻存条件取决于所用细胞系。

冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影响，因此不要通过涡旋震荡或者用力敲打培养瓶的方法使细胞脱落（培养昆虫细胞时除外），也不要高速离心细胞。

冻存培养基的选择

冻存细胞时必须选择冻存培养基，冻存培养基中应含有DMSO或者甘油等冷冻保护剂。

还可使用专门配制的完全冻存培养基，例如HyClone、Gibco的细胞冻存培养基。

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