ABO亚型鉴定
引言
ABO亚型是指在常见的人类A、B、AB、O四种血型之下进一步细分的ABO血型，通常认为亚型应具有遗传基础，且必须有明确的血清学特点[29]。根据Names for ABO (ISBT 001) blood group alleles v1.1 171023，ISBT命名的ABO基因亚型总共有207种，包括A亚型84种、B亚型47种、CISAB B(A)亚型12种、O亚型 64种。血清学表型仅有11种。
目前对ABO亚型的检测主要分为血清学和分子生物学两类技术。血清学技术是检测细胞和血清中血型抗原抗体，一般可根据受检者红细胞抗原与相应血清抗体反应的强弱、血清中抗体的特异性及分泌型人血型物质的性质及量来判断。分子生物学技术是检测血型抗原相应的遗传物质的多态性。当前，分子生物学技术的应用和发展较快，如运用PCR-SSP基因定型与测序技术，能准确对红细胞ABO血型系统进行基因分型，可用于解决血型血清学正反定型不符的血型确认等血型难题，是正确判定血型的重要辅助手段之一[29]。当ABO血型正反定型不一致或者血清学检测结果不符合孟德尔遗传规律，应用分子生物学技术辅助诊断，同时结合血清学实验的特性，明确样本血型，保证临床输血安全[30]。
一，部分ABO亚型血清学特点
A1和A2是血型血清学方法确定的最重要的A型红细胞亚型，其他不常见的A亚型还包括A3、Ax、Am、Ael等，其A抗原表达逐渐减弱，H抗原性反向升高，分泌型唾液中ABH抗原量也不同。A亚型的典型血清学特征是在正定型中红细胞与抗-A和抗-AB血清不发生凝集或仅发生弱凝集，在反定型中A亚型的血清与正常人的A型红细胞不发生凝集或发生弱凝集[29]。
Ax是ABO亚型中较为常见的一种表现型。与正常成人每个红细胞上A抗原位点数量A1型约为100万个，A2型约20万个相比，Ax亚型每个红细胞上A抗原位点约为4800个（区间1400－10000个）。抗原数量的大大减少使得Ax亚型人群与来源于B型个体的抗-A呈弱凝集反应，但是与来自O型个体的抗-AB的凝集强度增强，血清中常有抗-A1，分泌型个体的唾液中缺乏A物质，仅有H物质。临床上Ax常因患者正反定型不符、交叉配血不相合而被发现[31]。
cisAB表现型是一种独特的ABO表型，表现在同一等位基因的编码产物兼具A和B特异的糖基转移酶活性。cisAB血清学特征随着个体的不同、家系的不同而有所不同。cisAB型个体红细胞常表现为A强B弱，与抗H反应较一般AB亚型强，血清中多数有不规则的ABO抗体。cisAB型血清学上易与AB亚型混淆，一般需进行家系调查和分子生物学研究才能证实。Seto等通过构建基因突变体和原核细胞体外表达的方式，分别研究了AAAA，BAAA、BBAA、BBBA和BBBB 5种单倍型组合的糖基转移酶特异性和酶动力学，发现BAAA、BBAA和BBBA单倍型组合均同时拥有A型酶供体和B型酶供体催化功能。戚新等通过血清学试验推测ABBB重组酶能够同时催化A型酶供体和B型酶供体，血清学表达AB抗原，但催化A型酶活性比正常A型酶低很多，血清学A抗原表达非常弱[30,32]。
二、部分ABO亚型分子机理
Ax14：与正常的A101比较，发生了1个有意义的碱基突变（426G>C），导致142位氨基酸由蛋氨酸转变为异亮氨酸，引起蛋白质构象改变，进而影响酶的活性和抗原的表达[31]。
817InsG：马晓莉等报道1例献血者的ABO基因其他突变点具有A102/O02特点，但第7外显子发生817InsG（NCBI未收录）。由于InsG的发生导致T→G，引起第273位丝氨酸替换为丙氨酸，致其下游氨基酸链发生改变，造成糖基转移酶的空间结构发生变化，使糖基转移酶的能力发生改变，最终表现为A抗原的减弱（Am表型）[33]。
IVS6-25A>G：A101与IVS6-25G B等位基因和O01，O05核苷酸位置差异的比较见下表[36]。
基因型为O01/O05，O01 IVS6-25A＞G突变，血清学表现为B型，可能的机制有[36]：
①基因交换假说：不同的O等位基因遗传物质在有丝分裂期（自体嵌合体期）发生相互交换，在某些细胞重建了糖基转移酶的活性。
②内含子在等位基因转录和错位修复有重要作用。与O01 IVS6-25A＞G突变相关的等位基因有B101，B114，Bw07，Bw09四种，O01 IVS6-25A＞G突变可能启动α1,3-D-半乳糖基转移酶的表达。
③重组和基因交换以及等位基因的增强效应造成了ABO基因的多态性，从而产生不同的表型。第6内含子有Chi序列（5'-GCTGGCGG-3'）和类Chi样结构，在大肠埃希氏菌中Chi序列影响重组的频率，因此第6内含子是重组和基因交换的热点，依此类推，基因型为O01/O05，O01 IVS6-25A＞G突变可能为O-B-O重组，从而导致血清中有B酶表达。
829G>T：829位若为G则是A101型，829位若为A则是A204、部分A3、Ax、Bel04、部分O型。王静等首次发现829位为碱基T所取代，导致第277位氨基酸发生替换，缬氨酸被亮氨酸所替换(Val277Leu)，分子结构发生变化。因此，推断正常B等位基因发生的单核苷酸突变后，导致变异B基因编码的糖基转移酶活性降低，出现B抗原弱表达现象，且其红细胞上H抗原含量(2+)远高于正常AB型的H抗原含量(±)。829位氨基酸可能是编码糖基转移酶的关键位点，处于基因的结构域，决定糖基转移酶的种类和活性，以至于同一位置、不同种类、不同性质的氨基酸置换可导致血清学表型出现巨大差异[34]。
Bw12：第6外显子278C＞T突变(Bw12等位基因)导致B基因编码产物的第93位氨基酸由脯氨酸(Pro)转变为亮氨酸(Leu)。Bw12等位基因由许国先等在1例ABw亚型(与抗-B凝集强度为w)个体中首次发现并报道，为稀有等位基因。与之不同，池泉等报道Bw12样本B抗原中度减弱，与抗-B的凝集还强于该研究中的其他B抗原减弱样本。表明278C＞T突变对酶产物的活性具有一定影响[35]。
cisAB：A101和B101两个等位基因高度同源，二者在氨基酸编码区仅有7个核苷酸的差异，其中297A>G、657C>T和930G>A均位于密码子的摇摆位置，不引起氨基酸的改变；c.526G>C（p.R176G），c.703G>A（p.G235S）、c.796C>A（p.L266M）和c.803G>C（p.G268A）突变引起4个氨基酸的替换，从而使得酶特异性发生显著变化。cisAB和B（A）型基因就是在常见的A或B等位基因中发生1个或者2个碱基突变，使得A抗原有了一些B抗原的性质，B抗原有了一些A抗原的性质。在欧美发现的cisAB01，cisAB02和cisAB03等位基因，在中国台湾发现的cisAB04等位基因和在中国内陆发现的cisAB01var、cisAB05和cisAB06等位基因，7种等位基因突变点差异见下表[30]。
三、部分ABO亚型输血策略
鉴于AxB亚型中可能产生的抗-A1抗体，AxB亚型作为受血者时应该接受O型洗涤红和AB型血浆；而作为献血者，文献报道了4名正常AB型女性患者输注了AxB亚型血浆（低温下检出不规则抗-A）后均无输血反应发生，但研究者认为评价正常AB型患者输注AxB亚型红细胞的疗效还需要更多的数据[29]。
cisAB型个体的血清中常含有较强的不规则抗体，可严重影响输血的安全性和有效性，所以cisAB型个体作为献血者，其红细胞洗涤后可输注给AB型患者，但血浆中有不规则ABO抗体应废弃；cisAB型个体作为患者，通常选择输注O型洗涤红细胞加AB型血浆。cisAB型个体一般不建议其捐献机采血小板，否则可能造成血小板交叉配型不合无法输注给患者[32]。
来源：秀鹏生物