CHO细胞过表达人源蛋白案例

hGHR基因突变是Laron综合征的主要原因，为了构建稳定表达先天生长激素不敏感综合征相关的基因hGHR以及突变体（hGHR-E42K、hGHR-H56R）的CHO细胞株，Lihua等人利用PUC-hGHR质粒，定点突变获得两个突变体（hGHR-E42K、hGHR-H56R），限制性酶切法将目的基因克隆到真核载体pcDNA3.1/（zeo+），然后利用Lipofectamine2000将重组子转染至CHO细胞，通过Zeocin抗性筛选稳定表达hGHR以及突变体的细胞群，并用RT-qPCR 和Western Blot 证实hGHR，STAT5-P表达水平。结果显示，测序验证hGHR的E42K和H56R错义突变成功引入，并克隆到真核表达载体，转染后在CHO细胞中成功检测到hGHR和突变体的mRNA和蛋白，突变细胞株（hGHR-E42K、hGHR-H56R）的磷酸化STAT5蛋白表达量低于野生细胞株。因此，GHR突变后磷酸化STAT5水平，发现突变子的磷酸化STAT5α，STAT5β蛋白表达量都明显低于野生型GHR，解释了GHR突变患者生长发育迟缓的内在机制^[6]。

图 5 hGHR-E42K、hGHR-H56R的测序图

RT-qPCR检测 wt-hGHR及突变体在CHO细胞内的表达