Weil苏木精髓鞘染色法
方法:
⑴开颅,剪开硬脑膜。将脑连同脑膜一起取出,固定于10%甲醛液约10天,剥去脑膜和血管,将脑切成3~4块,换新液,再固定4个月左右。为保持取脑组织不变形,可用线扎住脑基底动脉倒悬于固定液中,或用纱布包脑,倒悬于固定液中。
⑵流水冲洗1~2天。
⑶冰冻切片厚3~5微米(槛脑连续切片)
⑷自来水冲洗1~2天,蒸馏水泡1天。
⑸经各级酒精上行及无水酒精 乙醚混合液各15天左右,各级酒精中间可换液一次。脱水时,可将酒精等与脑块放入真空干燥器内减压,每次抽气2~3分钟,隔日抽气一次,使脱水完成。
⑹入5%、10%、15%、20%火棉胶液,每次20天左右。也可在真空干燥器内进行:用一大培养皿盛火棉胶,将脑放入。放脑块于火棉胶内,干燥器的盖密封后,抽气减压,每次2~3分钟,隔2~3日抽气一次,置冷暗处。
⑺包埋时注入的火棉胶必须高出脑块约2倍,以免火棉胶凝固后,脑组织暴露于火棉胶外。
⑻在钟罩内约10天,火棉胶脑块如软橡皮状,15天后初步硬化,但仍有弹性;20天后如硬橡皮状,手摸无弹性,存于70%酒精。(也可按常规氯仿法进行,至足够硬度后切片)。
⑼切片40~60微米,保存于70%酒精 。
⑽取出脑片,蒸馏水稍洗。
⑾入明矾苏木精液30~60分钟 ,自来水换洗几次。
明矾苏木精染液:成熟的10%苏木精酒精溶液10毫升,蒸馏水90毫升,4%铁明矾水溶液100毫升,用时配
⑿2%铁明矾水溶液 分分色至纤维清晰为止
⒀自来水充分洗涤1小时。
⒁蒸馏水洗去切片表面多余的染液。
⒂70%酒精、80%酒精、95%酒精各15分钟 。
⒃移至大载玻片(15*17厘米)上,用无水酒精乙醚等量混合液滴洗切片,边滴边用柔软的毛笔轻扫切片,直至火棉胶全部溶去为止。
⒄再用毛笔将切片摊平于载玻片适当位置,待切片无皱褶,用2%火棉胶液滴于脑组织表面,形成一均匀薄层,粘牢脑组织,稍干,接入大型染色架脱水。
⒅入无水酒精 氯仿等量混合液2次各10分钟,二甲苯2次各10分钟,中性树胶封片。
结果:髓鞘蓝黑至黑色。