高胆固醇血症小鼠疾病模型的建立

文章作者首先从家族性高胆固醇血糖临床纯合子患者中（表现为血浆中高胆固醇和低密度脂蛋白升高，以及血动脉粥样硬化等表型），筛查到低密度脂蛋白受体（LDLR）未知新突变（比如E207X），且在体外细胞实验中证实，表达突变LDLR基因与其功能改变具有相关性。那么，如何证实该新发现的点突变与家族性高胆固醇血症与动脉粥样硬化的因果关系？作者明白，只依赖体外实验结果是很难具有真正说服力的，因此，作者计划在小鼠体内复制人LDLR-E207X点突变，以研究该基因新突变与疾病发生的关系。

构建LDLR-E207X点突变小鼠模型。我们通过比对人LDLR与小鼠Ldlr基因序列，找到对应人LDLR E207X点突变位于小鼠Ldlr的E208X位置，应用CRISPR/Cas9基因编辑技术，设计相应的gRNA系列及供体DNA，通过显微原核注射方法，成功构建Ldlr-E208X点突变小鼠模型。研究结果表明，因为该点突变引入终止密码，导致小鼠Ldlr蛋白表达功能缺失，且该小鼠模型在高脂饮食诱导下出现明显高胆固醇血症及动脉粥样硬化表型。通过构建Ldlr-E208X点突变小鼠模型，作者不仅证实了Ldlr-E208X点突变与临床患者高胆固醇血症及动脉粥样硬化间的因果关系，而且也建立该疾病的小鼠模型。