微生物常见接种方法

微生物接种是微生物学研究中最常用的基本操作,主要用于微生物的分离纯化。具体来说,就是在无菌条件下,用接种环或接种针等专用工具,从一个培养皿（上面可能存在各种杂菌落）挑取所需的微生物,转接到另一个培养基中进行培养的方法。

常用的接种方法有以下几种：

平板划线分离法

是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在无菌平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后可在平板培养基上生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。

优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离。此法主要用于菌种分纯，获得单菌落。

缺点：不能用于菌落计数。

涂布法

先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，然后用无菌吸管吸取0.1ml 菌液接种在已凝固的琼脂平板上。再用无菌L 型玻璃棒将菌液在平板上涂抹均匀，将涂抹好的平板平放于桌上20~30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。

优点：可以用于菌落计数，可以观察菌落特征。

缺点：接种前需梯度稀释，吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。

倾注法

吸取1ml 菌液加入平板中，倒入已融化并冷却至45~50℃的细菌培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。至长出菌落后即可计数。

优点：可以用于菌落总数的计数，较方便。

缺点：接种前需梯度稀释，不能观察菌落特征，不适用于严格好氧菌和热敏感菌。

斜面接种法

斜面接种法与穿刺接种类似，用接种针伸入菌种管内，挑取用来转种的菌落。伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线，或直接自下而上地蜿蜒划线。接种完成之后，用酒精灯火焰灭菌培养管口，并塞上棉塞，置于37℃培养。

优点：用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些生化特性。

注意事项：斜面一定要事先摆好，如果里面明显感觉到潮湿的话，必须继续放在培养箱里，直至表面干燥，否则接种是长不出来的，就算长出来了，菌落也非常不明显。对繁殖能力强的要用点接法，将接种针沿斜面点3到5点，对繁殖能力不强的细菌用“s形”划线法）

液体培养基接种法

用灭菌接种环挑取菌落或标本，在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，接种后，用酒精灯火焰灭菌培养管口，塞上棉塞。最后将试管在手掌上轻轻晃动，使菌体在培养基中均匀散开。

优点：液体培养适用于好氧微生物和植物组织培养，以迅速得到大量繁殖体，此法主要用于菌液比浊实验。

接种注意事项

1、充分灭菌接种环，避免污染其他标本。

2、接种环适当冷却后再取标本，以免接种时带不出标本中的菌种。

3、蘸取标本要适量，以免漏检。

4、液体培养基接种时要充分混匀，如尿液、胸腹水、脑脊液等。