组织学技术 固定(2)
固定
酒精固定常用浓度为80~100%,收缩大,一般与甲醛、立醋酸、氯仿等混合使用。
3 升汞(氯化高汞、二氯化汞、氯化汞)
白色粉末或针状结晶,剧毒
能沉淀一切蛋白质,不溶于水。
多与冰醋酸、甲醛等混合使用
对细胞核和细胞质固定较好。
升汞固定的组织会产生汞盐沉淀而影响染色效果。组织固定后脱汞处理。
将固定后的组织浸于碘酒至浅棕色的70%酒精,小块组织数小时,大块组织24~48小时。棕色减退时再加少量碘酒。脱汞后直接入高浓度酒精脱水,脱水时即可将碘脱去。
4 铬酸和重铬酸钾
铬酸为弱酸,红色或淡褐色结晶。
强氧化剂,不能与还原剂混合。
能沉淀一切蛋白质而不溶于水。铬酸固定的组织,不被胃蛋白酶和胰酶消化(Medawar)。
渗透力强弱,硬化低,收缩小。多与锇酸混合,固定线粒体和高尔基复合体。
重铬酸钾为橘红色结晶,弱酸性,强氧化剂。
多与甲醛、升汞配成混合液,用时配制,24小时失效。
不能沉淀蛋白质,但使蛋白质不溶于水,不能被酒精沉淀呈海绵状骨架,保存组织与生活状态相似的结构,尤其对细胞质成分固定较佳,对细胞核则较差。
对脂类有固定作用。
渗透力较强,组织收缩小,但脱水时收缩明显。
重铬酸钾固定的组织,经流水冲洗24~48小时再脱水。
5 苦味酸(三硝基酚)
黄色结晶,强酸性,水中饱和度为0.9~1.2%,酒精饱和度为%。
在空气中自生燃烧,常以饱和水溶液保存。
可沉淀一切蛋白质,对脂肪和类脂无作用。
渗透力弱,组织收缩大。 多与酒精、甲醛和冰醋酸混合使用。
常使组织呈黄色,在脱水时即可脱去。
黄色脱去:常用70%酒精 加少量碳酸锂洗去无色。
苦味酸对皮肤有软化作用。可溶解肌腱黏蛋白,使甲状腺胶质收缩甚至硬脆。
6 冰醋酸或醋酸(乙酸)
有酸性刺激性无色液体,低温时结冰,称冰醋酸
冰醋酸含量99%,醋酸含量30~40%
冰醋酸对沉淀核蛋白,对染色质固定良好,对球蛋白和白蛋白固定不佳,对脂肪和类脂无作用。
渗透力最强,能防止 组织自溶,使组织膨胀,减少组织的收缩。
不能单独使用。
7 锇酸
实际上是四氧化锇,其水溶液呈中性。
是细胞学和类脂最好最好的固定剂。电镜切片常用。